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   六.如何选用细胞培养基      培养基是维持体外细胞生存和生长的基本溶液,是组织细胞培养时最重要的条件。细胞培养基大致有:      (1)合成培养基      主要成分为:氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐、辅助物质(核酸降...


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   六.如何选用细胞培养基

      培养基是维持体外细胞生存和生长的基本溶液,是组织细胞培养时最重要的条件。细胞培养基大致有:

      (1)合成培养基

      主要成分为:氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐、辅助物质(核酸降解物、氧化还原剂等)。常用的有:

      ①199细胞培养基及其改良品种。 1950年由Morgan 等设计,DC-CIK,除BSS 外,含有53 种成分,添加适量的血清后,可广泛用于多种细胞培养、病毒学、疫苗生产等。 199 (HB)细胞培养基,CIK,主要应用于Vero 细胞、地鼠肾细胞转瓶培养生产狂犬、乙脑等疫苗,具有高缓冲性能,能够有效提高病毒滴度。

      ②BME细胞培养基。基础Eagle 培养基(Basal Medium Eagle),1955 年由Eagle 设计,BSS+12 种氨基酸+谷氨酰胺+8种维生素。简单、便于添加,适于各种传代细胞系和特殊研究用,在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMDM 等。

      ③MEM细胞培养基。低限量Eagle 培养基(Minimal Essential Medium),1959 年修改配方,删去赖氨酸、生物素,增加氨基酸浓度,适合多种细胞单层生长,是一种最基本、适用范围最广的培养基,是一种被广泛应用的培养基。需要注意的是,MEM 细胞培养基有含 Earle's 平衡盐的类型,也有含 Hanks'平衡盐的类型;有高压灭菌型的,也有过滤除菌型的;还有含非必需氨基酸的类型。生产和科研时,应根据实际情况注意选择合适的MEM 细胞培养基。另外,因MEM 培养基营养成分所限,脐血CIK,针对生产之特定细胞培养与表达时,并不一定是使用效果好或者成本低的培养基。


     使用培养液前不宜过早开瓶,开瓶后的培养液应保持斜位,避免直立,以防止下落细菌的污染。不再使用的培养液应立即封闭瓶口,培养的细胞在处理之前勿过早暴露在空气中。

      ④操作时尽量不要谈话,咳嗽以防止来自唾沫和呼出的气流所造成的污染。

      ⑤吸取培养液、细胞悬液时,应专管专用,一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去,以防止污染扩大或造成培养物之间的交叉污染。

      ⑥操作完毕后应整理好工作台面,用消毒水浸泡的纱布擦拭台面。

      (4)防止细胞交叉污染 所有从别处转来的或是自己所建的细胞系都要早期留有的充足的冻存储备,一旦怀疑发生交叉污染,可做细胞遗传学方面的鉴定,如发现原有的细胞遗传物发生改变,可以复苏早期冻存的细胞使用。重要细胞系(株)的传代工作应由两人独立进行。

      (5)无菌室的彻底消毒

      ①新洁尔灭全面彻底擦洗无菌室。使用前应稀释即配即用。新洁尔灭和酒精相比比较大的优点是便宜,因为新洁尔灭 500ml只需5元,而且可以稀释50倍用,CIK细胞,而同样量的酒精价格可能是新洁尔灭的几十倍。

      ②甲醛熏蒸法:甲醛是一种广谱灭菌剂菌,其水溶液和气体对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。甲醛价廉,熏蒸消毒时不损坏衣服、家具、皮革、橡胶等。市售的甲醛水溶液中一般含37-40%的甲醛。


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