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4.其他部分

      建筑围护方面,设计选用金属夹芯作为实验室的壁、顶板,地面选用绿色环氧自流平无缝铺装,板材之间及板材与地面相交处选用R50的喷塑铝型材圆弧相嵌,所有缝隙要求用中性抗菌防霉硅胶密封,这样处理后可基本消除实验室内的藏尘机会。电力方面,为确保GMP实验室的正常运转,此次采用双路电源为实验室供电,并设置了一台双路供电互投配电箱,以保证供电的不间断性。自动控制方面,每套净化空调系统均设置了一套自动控制系统及连锁装置,对实验室内的温湿度、风机运行状态及各种空调设备(风机、排风机阀门)的起顺序均实现了自动控制,CIK委托培养,避免了因人工操作失误而带来的不必要的损失(仅以JK2系统为例,原理见图4)。安全与通讯方面,在GMP实验室区域内设计了与本栋建筑中控值班室相连网的感烟系统、中控磁卡锁门禁系统和闭路电视监视系统。以消除因工作人员或非本室人员误人而带来的不安全隐患。另外根据GMP实验室相对比较封闭的特点,在每间实验室及洁净走廊的金属壁板上设计安装了对讲电话、电话插座、计算机网络插座、消防报警专用电话插座及紧急按钮等,以保证实验室内人员在任何情况下均可随时与外界保持联系,并有效地减少洁净环境因人员频繁进出而引起的干扰。


冷冻速率:

      冷冻速率是指降温的速度,直接关系到冷冻效果。细胞在冷冻过程中会发生如下变化:当细胞被冷至-5℃时,因溶液中加有冷冻保护剂而降低溶液的冰点,细胞内外溶液仍未结冰;当被冷至-5~-15℃之间时,细胞外溶液先出现结冰而细胞内仍保持未结冰状态。细胞内未结冰的水分子会比细胞外部分结冰溶液中的水分子具有更高的化学能。其结果是,细胞内水分子为了和细胞外水分子保持化学能的平衡,会向细胞外流动。冷冻速度不同,细胞内水分向外流动的情况也不相同:如果冷冻速度慢,细胞内水分外渗多,细胞脱水,体积缩小,CIK培养,细胞内溶质浓度增高,细胞内不会发生结冰;如果冷冻速度快,细胞内水分没有足够的时间外渗,结果随着温度的下降而发生细胞内结冰;如果冷冻速度非常快(即超快速冷冻),脐血CIK,则细胞内形成的冰晶非常小或不结冰而呈玻璃状态(玻璃化冷冻)。Luyet (1973)证实液体的凝固可分为两种形式:一种是晶体化,溶液中的分子呈有序排列;另一种情况是非晶体即玻璃化,液体中的分子呈无序状态,保持未凝固前的状态。

      不同的冷冻速度既然能使细胞内发生不同的生理变化,也可以对细胞产生不同的损伤。当冷冻速度过慢时,上海CIK,细胞脱水严重,细胞体积严重收缩,超过一定程度时即失去活性。同时冷冻速度过慢,还会引起细胞外溶液部分结冰,从而使细胞外未结冰的溶液中溶质浓度增高,产生溶质损伤。当冷冻速度过快时,细胞内水分来不及外渗,会形成较到冰晶,造成细胞膜及细胞器的破坏,产生细胞内冰晶损伤。超快速玻璃化冷冻对细胞存活来说是最为理想的冷冻方法。细胞内外呈玻璃化凝固,无冰晶形成或形成很小的冰晶,对细胞膜和细胞器不致造成损伤,细胞也不会在高浓度的溶质中长时间暴露而受损。

      不同细胞的最适冷冻速率不同。小鼠骨髓干细胞、酵母、人红细胞的最适冷冻速率分别为1.6℃/min、7℃/min 和200℃/min 。细胞与细胞之间的最适冷冻速率可在1.6℃~300℃/min ,故对一种细胞进行冷冻保存之前,首先需要测定其最适冷冻速率,以保证获得高的冷冻存活率。


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