间质干细胞成脂和成骨诱导分化
成骨和成脂诱导是鉴定干细胞的一种重要的方法,北京CIK,也是最常用、报道见得最多的方法。成骨最常用的染色方法是茜素红染色(碱性磷酸酶),成脂诱导最常用是Oil Red O (油红O)染色法。下面我介绍一下这两种染色方法的原理和步骤。 茜素红染色方法和原理:成骨诱导的过程是使钙离子能够以钙盐的方式沉淀下来,这就是我们常说的“钙结节”。鉴定钙结节的染色方法常用“茜素红”。
步骤:
(1)吸去诱导液,再PBS 洗一到两次;
(2)加入10%中性甲醛,固定30min-60min;
(3)吸去固定液,加入0.1%的茜素红染色液,染色6-10min;
(4)用PBS 洗两次,DC-CIK委托培养,去处残留的染色液;
(5)加入PBS,完成染色;
间充质干细胞对树突细胞的调控作用
树突细胞(DC)功能状态的改变能显著影响机体的免疫反应。成熟的树突细胞(mDC)高表达抗原提呈分子和共刺激因子,CIK培养,能够产生大量炎症因子,促进效应性T细胞的活化和增殖,而未成熟树突细胞(imDC)的抗原提呈功能和促进T细胞活化增殖潜能则相对较低。在不同的机体环境状态下,间充质干细胞可通过干预单个核细胞或CD34+造血干细胞向DC的分化成熟和迁徙发挥其免疫调控作用。
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